Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的现实生活中逐渐扩展

从第一次再次出现肝细胞自身抗体到再次出现1改型肾病药理学呕吐的的发展所部在老年人时期就有比较好的描绘出，多个肝细胞自身抗体特征性的老年人里面有70%在血清转换后10月内患上肾病，而随访15年的老年人这一分之一缩减到84%。主体而言，占药理学1改型肾病一半以上的改型1改型肾病的发病系统还没有给与必要的研究者。

更是加多的人开始运用于分期系统来定义1改型肾病的的发展：变异在再次出现多种肝细胞自身抗体时进入第1下一阶段，再次出现摄入量极其时进入第2下一阶段，再次出现呕吐时进入第3下一阶段。一些多发肝细胞自身抗体特征性的变异，在1期和2期，的发展速度慢，并发展为发病的1改型肾病。我们之前描绘出了一组成员在首次样品到多种肝细胞自身抗体样本后多于10年无肾病的正因如此慢的发展者，这组成员病变人数少，但必需特征颇为明确。随后，我们发现肝细胞自身抗原特异性CD8+T蛋白质质反可不在的发展较快的病变里面必需不存在，但在最近发病和与此相关的肾病病变里面很较易样品到。这可能表明，与的发展病变相较，这些病变自身免疫反可不的平衡增强。

早期研究者表明，尽管平衡性T蛋白质质(Treg)需求量正常，但肾病病变存在一些功能缺陷，其里面包括对IL-2的反可不能力也降低。此外，肾病病变里面的震荡CD4+T蛋白质质可能对平衡极具抵抗性，表现为震荡T蛋白质质的依赖性减弱，自然产生的Treg和体外产生的游离Treg，以及抗原历程的CD4+T蛋白质质里面IL-2反可不减弱。本研究者的目的是描绘出了CD4+平衡性T蛋白质质(Treg)在一小群正因如此较快的发展者里面的必需特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以年轻人为基础的纵向研究者，在21岁以下确诊的病变亲属里面检查1改型肾病的危险考量。我们之前描绘出了长期较快的发展者的必需特征，他们保持良好多重肝细胞自身抗体特征性超过10年，但没有再次出现肾病的药理学呕吐，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名再次保持良好无肾病并愿意提供大量血清样本的较快的发展者纳入T和B蛋白质质功能归纳。在目前为止的研究者里面，8名慢的发展者(SP组成员)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肝细胞自身抗体特征性。所有的参与者都处于1改型肾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身抗体对某些抗原的特征性反可不，然而，一名病变已经处于2期多于6年，但没有再次出现药理学呕吐，一名病变被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里面对该NADPH顺利完成了单独评估。除去外周血单个核蛋白质质(PBMCs)，改用多参数流式蛋白质质精和T蛋白质质依赖性试验评估NADPH里面Treg的频带、表改型和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无监理聚类归纳，评估Treg表改型。

结果：与肥胖症NADPH相较，来自慢的发展体的梦境CD4+T蛋白质质的监理聚类显示，启动时的梦境CD4+ Treg频带缩减，与糖皮质激素游离的TNFR相关蛋白质(GITR)表示缩减有关。一名HbA1c上升的病变与的发展较快者和匹配的对照组成员相较，Treg谱有所区别。功能归纳表明，与肥胖症NADPH相较，来自较快的发展体的Treg特异性的CD4+震荡T蛋白质质依赖性相较受损。表现为对震荡CD4+T蛋白质质CD25和CD134表示的依赖性缩减。

示意图1 有系统的表改型归纳显示，CD4+Treg亚改型在慢的发展队列里面缩减。由FlowSOM生成的Treg室，挤满在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -蛋白质质上。根据记号物表示鉴定出10个元簇:梦境T蛋白质质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白质质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)运用于9个有所不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个终端代表者一个集群(100个集群)，更是大的元集群(10个元集群)在终端组成员外面制做。每个终端里面的面包示意图说明单个记号的表示级别。(b)每个元聚类的热示意图，以显示主体记号表示。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成示意图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起数量级为每个metacluster箱内相示意图(数量级> 0.05%)确定为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白质质(l)。橘色橘色代表者ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 运用于CITRUS的预测模改型证明，Treg频带的缩减是的发展较快的标志。分级去正因如此化(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T蛋白质质上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表者性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示顺利完成除去，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(白斑)组成员以及NADPHSP 606(橘色)里面CD25+ cd127的频带汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去正因如此化邻域的箱内相示意图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)玉米簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，圆圈突出的簇被标识为SP和HD队列两者之间的有所不同。(j)箱内相示意图显示了在SP(白斑)和HD(灰点)组成员里面，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比起数量级(分之一)。(k)直方示意图显示每个簇的表改型(粉红色)和Treg记号比起表示与背景表示(紫色);上列，CPUTreg_3;前面动身，CPUTreg_4。背景与所有其他簇里面记号的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与肥胖症献血者相较，的发展较快者梦境treg的GITR缩减。每个梦境CD4+T蛋白质质元簇(梦境T蛋白质质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白质质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表示记号的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表示热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里面所有HD(黑色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表示串联，显示直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有NADPH包括，p< 0.05(紫色)NADPHSP 606和匹配的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表示，从分级去正因如此化，从所有HD(黑色)、所有SP(紫色)和SP 606(橘色)串联，显示直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自较快的发展的CD4+ treg蛋白质质控制震荡CD4+T蛋白质质的能力也降低。SP组成员用紫色的新线和橘色说明，HD组成员用黑色的新线和橘色说明，橘色的新线/橘色说明NADPHsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质质顺利完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被记号为CFSE, Treg按捕捉到的分之一反可不物。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质质，培养3在此之后顺利完成流式蛋白质质精样品。(a-d)与CD4+接收者者比起可不的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE依赖性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性一般而言。运用于特征性对照(启动时的自发蛋白质质不含treg)计算依赖性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 震荡CD4+T蛋白质质对较快的发展的T蛋白质质活化的依赖性更是引人注意。SP组成员用紫色的新线和橘色说明，HD组成员用黑色的新线和橘色说明，橘色的新线/橘色说明NADPHsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质质顺利完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel记号，treg按捕捉到的分之一反可不物。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质质，培养3在此之后顺利完成流式蛋白质质精(CD25反染)和蛋白质质因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者联合培养。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE依赖性一般而言(b)。(c,d) CD25依赖性一般而言(c)和CD134依赖性一般而言(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养里面的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们计算出来的论点是，来自较快的发展子的活化梦境CD4+Treg在GITR表示里面给与了扩展和丰富，特别强调了进一步研究者Treg在1改型肾病风险变异里面的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28